微生物包括:細(xì)菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、顯微藻類(lèi)等在內(nèi)的一大類(lèi)生物群體,它個(gè)體微小,與人類(lèi)關(guān)系密切。涵蓋了有益跟有害的眾多種類(lèi),廣泛涉及食品、醫(yī)藥、工農(nóng)業(yè)、環(huán)保、體育等諸多領(lǐng)域。在中國(guó)大陸地區(qū)及中國(guó)臺(tái)灣的教科書(shū)中,均將微生物劃分為以下8大類(lèi):細(xì)菌、病毒、真菌、放線(xiàn)菌、立克次氏體、支原體、衣原體、螺旋體。有些微生物是肉眼可以看見(jiàn)的,像屬于真菌的蘑菇、靈芝、香菇等。還有微生物是一類(lèi)由核酸和蛋白質(zhì)等少數(shù)幾種成分組成的"非細(xì)胞生物",但是它的生存必須依賴(lài)于活細(xì)胞。
在微生物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,會(huì)發(fā)生很多小問(wèn)題,現(xiàn)在對(duì)它們進(jìn)行部分匯總,希望能給大家?guī)?lái)幫助。
1.無(wú)菌操作:培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后,用經(jīng)過(guò)滅菌的接種工具在無(wú)菌條件下接種含菌材料于培養(yǎng)基上,這一操作稱(chēng)為無(wú)菌操作。
2.培養(yǎng)基:是人工配制的能滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)繁殖和積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。
3.假菌絲:酵母生長(zhǎng)旺盛時(shí),出芽形成的芽細(xì)胞尚未脫離母細(xì)胞又長(zhǎng)出了新芽,容易形成成串的細(xì)胞。如果各細(xì)胞之間連接處面積小于細(xì)胞直徑,形成的這種藕節(jié)狀的細(xì)胞串稱(chēng)為假菌絲。
4.大腸菌群:大腸菌群系指一群在電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)37℃、24h能發(fā)酵乳糖,產(chǎn)酸、產(chǎn)氣,需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。
5.細(xì)菌菌落總數(shù):指被檢樣品通過(guò)一定的處理方法,培養(yǎng)一段時(shí)間后,每毫升或每毫克樣品中所含細(xì)菌的菌落數(shù)。由于經(jīng)過(guò)適當(dāng)稀釋的樣品中每個(gè)細(xì)胞可形成一個(gè)單菌落,所以菌落數(shù)即是細(xì)菌活菌總數(shù)。 無(wú)菌吸管上端塞入棉花的主要目的是為了防止污染菌液吸入口中 。
6.稀釋平板計(jì)數(shù)時(shí),細(xì)菌,放線(xiàn)菌,真菌的計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)是選擇每皿中菌落數(shù)在10-100個(gè)的稀釋度進(jìn)行計(jì)數(shù) 為了滿(mǎn)足微生物對(duì)微量元素的需要,配制培養(yǎng)基所用的水建議使用自來(lái)水 實(shí)驗(yàn)室通常使用血球計(jì)數(shù)板測(cè)酵母菌的總菌數(shù)或霉菌的孢子數(shù) 。
7.浸油的油鏡鏡頭可用軟的擦鏡紙擦凈。
8.稀釋平板計(jì)數(shù)通常采用的是十倍稀釋法 。
9.使用手提滅菌鍋滅菌后,不可直接打開(kāi)排氣閥排氣 鏡臺(tái)測(cè)微尺每小格的實(shí)際長(zhǎng)度是10微米。
10.用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí),按對(duì)角線(xiàn)方位,數(shù)左上、左下、右上、右下的4個(gè)中方格計(jì)數(shù) 。
11.測(cè)微生物的細(xì)胞大小時(shí),需要校正的是目鏡測(cè)微尺每格的實(shí)際長(zhǎng)度。
12.霉菌中有足細(xì)胞的霉菌為曲霉。
13.明膠液化實(shí)驗(yàn),明膠的水解是由于細(xì)菌所產(chǎn)生的明膠酶(亦稱(chēng)類(lèi)蛋白水解酶)的作用。
14.大腸桿菌為革蘭氏陰性菌,革蘭氏染色后菌體呈紅色;枯草芽孢桿菌和八疊球菌為革蘭氏陽(yáng)性菌,革蘭氏染色后菌體呈紫色。
15.培養(yǎng)基的pH值在加熱滅菌后會(huì)下降0.3~0.4,因此配制時(shí)的pH值要比要求的略高一些。
16.鏡臺(tái)測(cè)微尺每小格的實(shí)際長(zhǎng)度是10微米。
17.實(shí)驗(yàn)室做固體培養(yǎng)基,常加2%的瓊脂作凝固劑,做半固體培養(yǎng)基時(shí),瓊脂加入量通常是1%。
18.血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)區(qū)的面積是1mm2。
19.檢查乳品和飲料是否含有大腸桿菌(E.coli)等腸道細(xì)菌,可采用伊紅美蘭培養(yǎng)基,在這種培養(yǎng)基平板上能分解乳糖產(chǎn)酸的菌_(大腸菌群)會(huì)形成具有金屬光澤的紫黑色小菌落。
20.測(cè)定酵母細(xì)胞出芽率時(shí),芽體的標(biāo)準(zhǔn)是小于細(xì)胞的1/2,如果視野中的芽體數(shù)為15個(gè),細(xì)胞數(shù)為60個(gè),則出芽率為25%。
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