固體培養(yǎng)法是指將微生物接種在固體培養(yǎng)基上生長繁殖的方法,固體培養(yǎng)基包括瓊脂平板和瓊脂斜面。瓊脂平板用于菌落計數(shù)和分離菌落,瓊脂斜面用于微生物形態(tài)觀察或保藏,接種后的平板倒置(防止冷凝水滴落到生長的菌體上),堆疊(一般不超過6個平皿)放于恒溫培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)皿之間和培養(yǎng)皿距離箱壁至少要25 mm,保證空氣循環(huán),這時,對各個點的溫度要進(jìn)行驗證。為防止培養(yǎng)基過分干燥,可用塑料袋松散的包一下,也可以在培養(yǎng)箱內(nèi)放一杯水防止培養(yǎng)基干癟。斜面試管放于試管架上,然后放置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。除此兩種方法屬固體培養(yǎng)法外,還有以下幾種。
(一)插片培養(yǎng)法
(1)用高壓滅菌后冷卻到50℃左右的培養(yǎng)基制備平板,凝固后用接種環(huán)挑取菌懸液劃線接種。
(2)將滅過菌的蓋玻片以450斜插入固體培養(yǎng)基中,緊靠接種物,使菌體沿蓋玻片生長,置28 ℃~32 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d-5 d。
(3)培養(yǎng)完畢后,取出蓋玻片放在載玻片上,直接用低倍鏡觀察放線菌的自然生長個體形態(tài)。也可在載玻片上滴一滴0.1%的美藍(lán)水溶液,再放上插片,用高倍鏡觀察孢子結(jié)構(gòu)。
(二)載玻片培養(yǎng)法
(1)在培養(yǎng)皿底部鋪一張圓形濾紙,濾紙上放上一根“U"形載玻片擱架,其上放一塊干凈的載玻片和兩片蓋玻片,蓋上皿蓋,外用紙包扎,高壓滅菌后,烘干備用。
(2)將經(jīng)過高壓滅菌冷卻到50 ℃左右的培養(yǎng)基,倒入另外的無菌培養(yǎng)皿中制成2mm厚的平板,凝固后用無菌刀切成1cm2的方塊,放置于載玻片上左右各一塊。
(3)瓊脂塊的四周用接種針接種上霉菌孢子,而后蓋上蓋玻片,壓緊瓊脂塊,在濾紙上加2 ml -3 ml。無菌水或20%無菌甘油,保濕培養(yǎng),培養(yǎng)好后,可直接用低倍鏡觀察
(三)透析膜培養(yǎng)法
透析膜浸在試管中高壓滅菌后,用無菌的鑷子取出后平鋪在瓊脂平板上,在膜上用接種工具點接上菌種,蓋好皿蓋后,進(jìn)行培養(yǎng)。也可直接把透析膜放在液體培養(yǎng)基里浸泡后,直接鋪在平皿中,滅菌后進(jìn)行點種微生物,再蓋上皿蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
(四)其他
應(yīng)用在釀造工業(yè)上的培養(yǎng)瓶培養(yǎng),盤曲、簾子曲培養(yǎng),厚層通風(fēng)培養(yǎng)。
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