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原代細(xì)胞骨架的染色方法

閱讀:409      發(fā)布時(shí)間:2019-6-20
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      1.  用PBS液漂洗蓋玻片的原代細(xì)胞3次,每次30s;

      2.  在室溫中用3%甲醛/PBS固定20min;

      3.  用PBS液再漂洗3次,每次1min,后用濾紙吸干多余的PBS液;

      4.  投入冷丙酮中(-10—-20℃)7min;

      5.  用PBS漂洗3次,每次1min,后用濾紙吸干多余的PBS液;

      6.  向直徑6cm的干凈碟皿*滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的一級(jí)抗微管蛋白抗體,令小蓋片細(xì)胞面向下扣在抗體液上,覆以皿蓋,于37℃生化培養(yǎng)箱中放置45min—1h;

      7.  向碟皿內(nèi)勻速緩慢滴加PBS,令蓋片浮起在液面,用鑷子夾出,按步驟3處理;

      8.  向干凈碟皿*滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的熒光標(biāo)記的二抗,其后操作按步驟6進(jìn)行;

      9.  按步驟7和3操作;

      10. 滴pH8.5的90%的甘油/PBS少許于載玻片上,把小蓋片的原代細(xì)胞面覆在大蓋片上;

      11. 將蓋片置于熒光顯微鏡下觀察;

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