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　　一、目的要求
 

　　1.掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法，并觀察其形態(tài)特征。
 

　　2.掌握常用的霉菌制片方法
 

　　二、基本原理
 

　　霉菌菌絲較粗大，細(xì)胞易收縮變形，而且孢子很容易飛散，所以制標(biāo)本時(shí)常用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液。此染色液制成的霉菌標(biāo)本片其特點(diǎn)是：(a)細(xì)胞不變形；(b)具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長時(shí)間；(c)溶液本身呈藍(lán)色，有一定染色效果。
 

　　霉菌自然生長狀態(tài)下的形態(tài)，常用載玻片觀察，此法是接種霉菌孢子于載玻片上的適宜培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后用顯微鏡觀察。此外，為了得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)還可利用玻璃紙透析培養(yǎng)法進(jìn)行觀察。此法是利用玻璃紙的半透膜特性及透光性，將霉菌生長在覆蓋于瓊脂培養(yǎng)基表面的玻璃紙上，然后將長菌的玻璃紙剪取一小片，貼放在載玻片上用顯微鏡觀察。
 

　　三、器材
 

　　曲霉(Aspergillussp.)，青霉(Penicillium sp.)，根霉(Rhizopus sp.)，毛霉(Mucor sp.)；
 

　　乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液，20%甘油，查氏培養(yǎng)基平板，馬鈴薯培養(yǎng)基；無菌吸管，載玻片，蓋玻片，U形棒，解剖刀，玻璃紙，濾紙等。
 

　　四、操作步驟
 

　　1.一般觀察法
 

　　于潔凈載玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液，用解剖針從霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置染色液中，再細(xì)心地將菌絲挑散開，然后小心地蓋上蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時(shí)再換高倍鏡。
 

　　2.載玻片觀察法
 

　　(1)將略小于培養(yǎng)皿底內(nèi)徑的濾紙放入皿內(nèi)，再放上U形玻棒，其上放一潔凈的載玻片，然后將二個(gè)蓋玻片分別斜立在載玻片的兩端，蓋上皿蓋，把數(shù)套(根據(jù)需要而定)如此裝置的培養(yǎng)皿疊起，包扎好，用1.05kg/cm2，121.3℃滅菌20分鐘或干熱滅菌，備用。
 

　　(2)將6—7ml滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基倒入直徑為9cm的滅菌平皿中，待凝固后，用無菌解剖刀切成0.5—1cm2的瓊脂塊，用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)的載玻片上，每片上放置2塊。
 

　　(3)用滅菌的尖細(xì)接種針或裝有柄的縫衣針，取(肉眼方能看見的)一點(diǎn)霉菌孢子，輕輕點(diǎn)在瓊脂塊的邊緣上，用無菌鑷子夾著立在載玻片旁的蓋玻片蓋在瓊脂塊上，再蓋上皿蓋。
 

　　(4)在培養(yǎng)皿的濾紙上，加無菌的20%甘油數(shù)毫升，至濾紙濕潤即可停加。將培養(yǎng)皿置28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)一定時(shí)間后，取出載玻片置顯微鏡下觀察。
 

　　3.玻璃紙透析培養(yǎng)觀察法
 

　　(1)向霉菌斜面試管中加入5ml無菌水，洗下孢子，制成孢子懸液。
 

　　(2)用無菌鑷子將已滅菌的、直徑與培養(yǎng)皿相同的圓形玻璃紙覆蓋于查氏培養(yǎng)基平板上。
 

　　(3)用1ml無菌吸管吸取0.2ml孢子懸液于上述玻璃紙平板上，并用無菌玻璃刮棒涂抹均勻。
 

　　(4)置28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)后，取出培養(yǎng)皿，打開皿蓋，用鑷子將玻璃紙與培養(yǎng)基分開，再用剪刀剪取一小片玻璃紙置載玻片上，用顯微鏡觀察。
 

　　五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告
 

　　1.結(jié)果
 

　　繪圖說明你所觀察到的霉菌形態(tài)特征。