ELISA試劑盒為保證實驗數(shù)據(jù)精彩呈現(xiàn)首要選定ELISA類型,ELISA技能可用于測定抗原,也可用于測定抗體。ELISA試劑盒方法中有三個必要的試劑:
(1) 固相的抗原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent)
(2) 酶符號的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate)
(3) 酶反應(yīng)的底物
ELISA試劑盒分為以下幾種類型,實驗君首要需求根據(jù)自己的待檢物來判定試劑盒類型:
1. 雙抗體夾心法:針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體別離作為固相捕獲抗體和酶標(biāo)檢測抗體。適用于測定二價或二價以上的大分子抗原如血漿中的細胞因子,不適用于測定半抗原及小分子單價抗原。同理,也有雙抗原夾心法測抗體。
2.直接法:將抗原直接固定在固相載體上,參與酶符號的一抗,即可測定抗原總量。此法操作手續(xù)簡略,因無須運用二抗可防止交互反應(yīng)。
3.間接法:間接法是檢測抗體常用的方法,其原理為利用酶符號的抗抗體(抗*抗體)來檢測與固相抗原結(jié)合的待檢抗體。
4.競爭法:小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個以上的位點,因而不能用雙抗體夾心法進行測定,可以選用競爭法模式。當(dāng)抗原材猜中的煩擾物質(zhì)不易除去,或不易得到滿意的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體。
根據(jù)樣品中檢測物水平來選擇ELISA試劑盒:
如果實驗君關(guān)于樣品中待檢物的水平?jīng)]有任何可參看的數(shù)據(jù),hao選擇寬動力學(xué)檢測規(guī)劃的試劑盒。如果樣品中待檢物的含量很低,建議選擇高靈敏度的試劑盒。為了下降基質(zhì)效應(yīng),有必要用稀釋液至少做2倍稀釋。如果樣品中待檢物含量遠超過試劑盒的檢測規(guī)劃(標(biāo)曲規(guī)劃), 也需做恰當(dāng)?shù)谋稊?shù)稀釋。在終計算結(jié)果時,需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
根據(jù)樣本可獲得性來選擇ELISA試劑盒:一般來說,商業(yè)化試劑盒的樣品用量都在50ul或100ul, 但也有一些供貨商的試劑盒對樣品的用量要求可少至10ul。如果您的樣品很名貴或較難獲取,則需求仔細考慮試劑盒對樣品用量的要求。如果樣品量少,且要做多因子檢測時更需穩(wěn)重。
ELISA試劑盒細致比較試劑盒要害性技能參數(shù):
ELISA試劑盒的要害技能參數(shù)包括板內(nèi)差異性、板間差異性、批間差異性、重復(fù)性、特異性及交叉反應(yīng)性、回收率等。如果實驗君常常打開ELISA實驗,建議運用同一廠家的試劑盒,這樣可盡量保證數(shù)據(jù)的重復(fù)性(當(dāng)然條件是實驗條件的一致性)。關(guān)于科研用的定量ELISA試劑盒,不同的生產(chǎn)廠家運用的抗體對、酶以及底物、生產(chǎn)工藝和研發(fā)實力不盡相同,天然不同廠家試劑盒測出的數(shù)據(jù)會有差異。
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