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凍存的細胞該如何開始培養(yǎng)?

時間:2019/2/25閱讀:261
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凍存的細胞該如何開始培養(yǎng)?
(1) 將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。
(2) 用10秒鐘時間將小管的蓋子擰松1/4以去除殘留在螺紋處的液氮,然后將蓋子蓋緊。
(3) 將小管放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉(zhuǎn),直到管內(nèi)物體*融化。
(4) 將小管立即從水浴中拿出,擦干,轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。
(5) 用70%的酒精沖洗小管,然后擦去多余酒精。
(6) 打開蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋。用1ml離心管離心內(nèi)容物。
(7)平衡管內(nèi)物,用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶(多數(shù)細胞用T-75的培養(yǎng)瓶)。多數(shù)細胞類型推薦接種密度為每平方厘米5000細胞。
(8) 蓋好蓋子,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。
(9) 將培養(yǎng)瓶放放培養(yǎng)箱中(37℃,5%CO2,95%空氣)
(10) 植入培養(yǎng)后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。

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