小麥?zhǔn)?二大糧食作物，僅次于玉米，作為人類主食之一，對(duì)于小麥的研究由來已久?，F(xiàn)在利用現(xiàn)代分子生物學(xué)手段改良小麥種子,另外由于現(xiàn)今轉(zhuǎn)基因植物的廣泛應(yīng)用以及外來生物入侵，海關(guān)檢驗(yàn)檢疫部門對(duì)于轉(zhuǎn)基因，病蟲害檢測(cè)方面也需要一些快速的檢測(cè)手段。

      Omega Bio-Tek Seed Direct PCR kit 能夠快速，準(zhǔn)確，，安全的從各種干燥或者新鮮植物種子中制備高質(zhì)量的基因組 DNA 用于快速的 PCR 檢測(cè)，特別適合各種高通量快速檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

方案一：

特點(diǎn)：*不用離心和研磨操作，也不用長時(shí)間浸泡種子，只需將一粒完整的種子在裂解液中消化 1-2 小時(shí)即可以用來 PCR 檢測(cè)。

一、 材料：新鮮或者放置不超過一年的小麥種子樣品

二、方法：

1、取 1 粒小麥種子放入 2ml 離心管中，加入 95ul PS1 和 5ul PS2，56℃水浴 1-2 小時(shí)。

2、將樣品置于 90℃水浴 5min，冷卻后加入 100ul PS3，短暫渦旋 20 秒。所得抽提液可直接作為 PCR 反應(yīng)的模板。

注：如果樣品較多，可以先將 PS1 和 PS2 按比例混合，再分裝到每個(gè)樣品管中?？蛻粢部梢允褂?PCR 管或者 96 孔 PCR 板代替 2ml 離心管，直接在 PCR 儀上加熱。

三、結(jié)果：

1、取 5ul E.Z.N.A. Seed Direct PCR Kit 抽提的 DNA 作為 50ul 體系 PCR 擴(kuò)增的模板，以植物 ITS1 為目標(biāo)基因（上游引物：5’-AGAAATCGTAACAAGGTTTCCGTAGG-3’, 下游引物：5’-TCTCCGCTTATTGATATGC-3’），Omega 2×Taq Master Mix 35 個(gè)循環(huán)擴(kuò)增約 650bp 左右的片段，取 10% PCR 產(chǎn)物 1.5%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果如下。結(jié)果表明，使用 E.Z.N.A. Seed Direct PCR Kit 抽提得到的基因組 DNA *可以用于 PCR 反應(yīng)，擴(kuò)增出來的目的條帶清晰，大小一致。 M：200bp DNA marker C1： 陽性對(duì)照（一粒干燥的小麥種子使用 E.Z.N.A.Plant DNA Mini kit 抽提后，用 100ul Elution Buffer 洗脫，取 3ul 作為 PCR 反應(yīng)的模板）； C2：陰性對(duì)照（用滅菌雙蒸水作為模板） 1-45：不同小麥種子樣品

2、取 5ul E.Z.N.A. Seed Direct PCR Kit 抽提的 DNA 作為 50ul 體系 PCR 擴(kuò)增的模板，以小麥 alpha-type gliadin 為目標(biāo)基因（上游引物：5’- AGACCTTTCTCATCCTTGCC-3’,下游引物：5’- TTCCTTATTTCCTCGAACTGG-3’）， Omega 2×Taq Master Mix 35 個(gè)循環(huán)擴(kuò)增 766bp 的片段，取 16% PCR 產(chǎn)物 1.5%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果如下。結(jié)果表明，使用 E.Z.N.A. Seed Direct PCR Kit 抽提得到的基因組 DNA *可以用于 PCR 反應(yīng)，擴(kuò)增出來的目的條帶清晰，大小一致。M：DL2000 DNA marker C2：陰性對(duì)照（用滅菌雙蒸水作為模板） 1-8：八粒小麥種子