細(xì)胞可是許多生物學(xué)實驗的主角。如果細(xì)胞培育的不好，那么實驗的結(jié)果也不會好到哪兒去。在此我公司技術(shù)人員給大家總結(jié)了細(xì)胞培養(yǎng)的技巧，這份干貨請收好了！
 

　　1.確保所有實驗室材料都無菌
 

　　交叉污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵。即使是zui輕微的污染，也可能毀了幾個星期的成果。因培養(yǎng)箱內(nèi)溫暖潮濕，真菌極易生長，因此必須注意定期清潔。此外，在將培養(yǎng)瓶、移液管及其他的相關(guān)物品放入超凈臺之前，應(yīng)用酒精擦拭干凈，以避免污染。
 

　　2.小心處理您的培養(yǎng)物
 

　　細(xì)胞培養(yǎng)的脆弱性怎么強(qiáng)調(diào)也不為過。劇烈搖晃，或連續(xù)的溫度波動可能會對生長產(chǎn)生不利的影響。確保培養(yǎng)箱是水平的，溫度均一，且遠(yuǎn)離電動儀器。此外，盡量避免一次處理多個細(xì)胞系，因為它可能會影響細(xì)胞的基因型和表型。您還應(yīng)定期完成STR圖譜分析，以確認(rèn)細(xì)胞系的身份。
 

　　3.在使用前正確解凍細(xì)胞
 

　　盡管解凍看起來是個簡單的步驟，但必須操作得當(dāng)，以免傷害細(xì)胞。長時間暴露在高溫條件下會使細(xì)胞無法鋪板。因此，凍存管應(yīng)當(dāng)在37°C水浴中放置2分鐘，然后用條件培養(yǎng)基稀釋，以避免DMSO造成直接傷害。
 

　　4.使用對數(shù)生長期的細(xì)胞
 

　　細(xì)胞培養(yǎng)過程共有3個階段：停滯期、對數(shù)期和平臺期，分別代表了低細(xì)胞生長、高細(xì)胞生長和無細(xì)胞生長。zui有活力的細(xì)胞是健康的，快速分裂的，在對數(shù)期以70-80%的匯合度存在。
 

　　5.在傳代之前不要讓細(xì)胞*匯合
 

　　匯合度是指貼壁細(xì)胞占據(jù)培養(yǎng)瓶表面積的比例。*匯合意味著100%的表面都被貼壁細(xì)胞覆蓋。一定要避免這種狀態(tài)，因為它意味著細(xì)胞不能繼續(xù)生長。不過，當(dāng)務(wù)之急是使用活躍生長的細(xì)胞。
 

　　6.選擇*的培養(yǎng)基開發(fā)策略
 

　　在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基是控制產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)量和成本的zui重要因素。必須針對每種培養(yǎng)物來定制培養(yǎng)基，以優(yōu)化實驗結(jié)果。在決定以哪種方式來開發(fā)您的培養(yǎng)基時，您有幾個選擇。您可以購買現(xiàn)成的，自己開發(fā)，也可以與另一家公司合作開發(fā)特定的培養(yǎng)基。在這個過程中，您需要考慮時間和成本等因素。
 

　　7.配制干粉培養(yǎng)基時評估水的質(zhì)量
 

　　液體培養(yǎng)基往往會帶來比干粉培養(yǎng)基更高質(zhì)量的結(jié)果。這可能與水的質(zhì)量有關(guān)。由于細(xì)菌在水中迅速生長，故需要監(jiān)控內(nèi)毒素及其他污染物。商業(yè)公司有資源來監(jiān)控和控制細(xì)菌生長，比如過濾器。因此使用商業(yè)化生產(chǎn)的液體培養(yǎng)基會更加可靠一點(diǎn)。
 

　　8.利用細(xì)胞的代謝特性來優(yōu)化培養(yǎng)基
 

　　分析使用過的培養(yǎng)基，有助于鑒定必要成分的代謝速率，包括氨基酸和維生素。從細(xì)胞生長階段和蛋白生產(chǎn)階段收集到的動態(tài)代謝圖譜可用來平衡基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加培養(yǎng)基，指導(dǎo)培養(yǎng)基的重點(diǎn)，有助于蛋白質(zhì)的生產(chǎn)。
 

　　9.避免細(xì)胞的過度消化
 

　　*通過消化負(fù)責(zé)讓細(xì)胞與容器結(jié)合的蛋白質(zhì)，而實現(xiàn)貼壁細(xì)胞的傳代。如果細(xì)胞暴露在*中時間太長，則*將開始切割細(xì)胞表面蛋白，這會影響細(xì)胞行駛正常功能的能力。
 

　　10.培養(yǎng)基中不要一直使用抗生素
 

　　隨著細(xì)胞培養(yǎng)物更加頻繁地暴露在抗生素中，對抗生素有著天然耐藥性的菌株將開始出現(xiàn)。
 

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