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質粒小量抽提試劑盒使用說明書

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     質粒小量抽提試劑盒(Plasmid Mini Preparation Kit, Plasmid Miniprep Kit)是一種用于從大腸桿菌中進行小量質??焖俪樘岬碾x心柱式試劑盒。
      本試劑盒適用于常用的EndA-菌株DH5α、JM109和XL-1 blue等。對于EndA+菌株如JM110、BL21(DE3)、TG1和HB101
等,可以順利完成質粒抽提,但從EndA+菌株中抽提獲得的質粒會有輕微的核酸酶污染,如果在內切酶緩沖液中37℃孵育1小時會導致質粒全部降解。從EndA+菌株中抽提質粒時*使用的
D0007S/D0007M 質粒小量抽提試劑盒(通用型)、D0020 質粒中量抽提試劑盒(通用型)和D0028 質粒大量抽提試劑盒(通用型)。
      野生型大腸桿菌中表達Endonuclease I,能切割并降解雙鏈DNA。編碼Endonuclease I的基因是endA,如果endA突變失活,其基因型會被標注為endA1,相應的突變菌株被稱為EndA-菌株,而野生型菌株則被稱為EndA+菌株。常見的EndA-和EndA+菌株參見附表1。從EndA+菌株中抽提的質粒,微量核酸酶和質粒結合而容易被共純化,導致容易降解。
      本試劑盒采用了一種新型的離子交換柱。在特定條件下,使質粒能在離心過柱的瞬間,結合到質粒純化柱上,在一定條件下又能將質粒充分洗脫,從而實現質粒的快速純化。無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,12個樣品只需不足30分鐘即可完成。
      每個質粒純化柱可以結合的質粒量的上限約為20微克。每個純化柱可用于抽提1-5毫升用LB培養(yǎng)過夜的大腸桿菌。抽提所得質粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提獲得的質粒量會受質??截悢档纫蛩赜绊?。抽提獲得的質粒DNA的OD260和OD280比值也會因菌種不同等原因而略有波動。
      本試劑盒抽提所得到的質??芍苯佑糜谵D染細胞,DNA測序,PCR,基于PCR的突變,體外轉錄,轉化細菌,內切酶消化等。

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