【中文名稱】：大鼠胰島細胞抗體(ICA)ELISA試劑盒Kit價格說明書
【英文名稱】：Ratisletcellantibody,ICAELISAKit
【產(chǎn)品規(guī)格】:96T/48T。
【保存條件】：2-8℃低溫保存
【保質(zhì)期】：6個月，所有試劑盒均提供批次
試劑盒組成：
封板膜:2片(48)/2片(96)
說明書:1份
密封袋:1個
標準品： 2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶標包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存
樣品稀釋液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
終止液: 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作注意事項：
1)試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7)底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8)加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9)按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
操作步驟：
1. 取出試劑盒，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實驗過程應在室溫(20-25℃)內(nèi)進行。
2. 取出酶標板，按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對照加入50μl的蒸餾水；
4. 在樣品孔中加入10μl的*；(不含空白對照孔,切忌：*只加樣品孔！)
5. 在各孔中加入100μl的酶標記溶液；(不含空白對照孔)
6. 將酶標板用封口膠密封后，37℃孵育反應 1小時；(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7. 充分清洗酶標板3-5次，保持各孔有充足的水壓；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
8. 酶標板洗滌后用吸水紙*拍干；
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；(不含空白對照孔)
10. 20-25℃下避光反應15分鐘；
11.各孔加入50μl終止液，終止反應；
