中文名：小鼠白細胞介素17F(IL-17F)ELISA試劑盒
 

　　規(guī)格：48t/96t
 

　　保存：2~8℃
 

　　有效期：6個月
 

　　樣本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
 

　　特點：敏感性高、特異性強、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。
 

　　用途：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。
 

　　種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
 

　　運輸方式：現(xiàn)貨供應(yīng)，一般為快遞運輸，江浙滬隔天到，外地及偏遠地方三至五天時間到貨。
 

　　檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。
 

　　l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠白細胞介素17F(IL-17F)的含量。
 

　　l 有效期：6個月
 

　　l 保存條件：2-8℃
 

　　l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷
 

　　實驗原理
 

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被小鼠白細胞介素17F(IL-17F)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠白細胞介素17F(IL-17F)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，計算樣品濃度。
 

　　樣本處理及要求
 

　　1.  血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
 

　　2.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
 

　　3.  組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果)，稱重后將*碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。*在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
 

　　4.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
 

　　注：標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
 

　　標本處理
 

　　1.  本公司只對試劑盒本身負責(zé)，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。
 

　　2.  實驗前應(yīng)預(yù)測標本含量，如果標本濃度過高，應(yīng)對標本進行稀釋，使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
 

　　3.  若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進行預(yù)實驗驗證其有效性，并注意留存樣本。
 

　　4.  使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。
 

　　5.  若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。
 

　　6.  某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。
 

　　7.  建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。
 

　　需要而未提供的試劑和器材
 

　　酶標儀(450nm)
 

　　高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
 

　　37℃恒溫箱
 

　　蒸餾水或去離子水
 

　　注意事項
 

　　嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
 

　　洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
 

　　消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
 

　　底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
 

　　避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
 

　　在儲存和溫育時避免強光直接照射。
 

　　平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
 

　　任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
 

　　不能使用過期產(chǎn)品。
 

　　如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
 

　　試劑準備
 

　　試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
 

　　20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
 

　　操作步驟
 

　　1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 

　　2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
 

　　3.  樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
 

　　4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 

　　5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
 

　　6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
 

　　7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
 

　　實驗結(jié)果計算
 

　　以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
 

　　試劑盒性能
 

　　1.  檢測范圍：1.5 pg/mL – 48 pg/mL。
 

　　2.  靈敏度：zui低檢測濃度小于0.1 pg/mL。
 

　　3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
 

　　4.  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。
 

　　說明
 

　　1.  由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。
 

　　2.  zui終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān)，請務(wù)必準備充足的標本備份。
 

　　3.  不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，電子版說明書僅作參考。
 

　　4.  只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到的檢測結(jié)果。