在生物醫(yī)學(xué)實驗中常常會用到細(xì)胞系，指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可*連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。
       細(xì)胞系是經(jīng)過細(xì)胞傳代或續(xù)代培養(yǎng)是將細(xì)胞從現(xiàn)有的培養(yǎng)物分開或分出來開始新的培養(yǎng)，并加入新鮮培養(yǎng)液來促進擴增的常用手段。
       但是細(xì)胞系與新分離的或原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件相類似，但也有一些基本不同的地方：
      （1）每個細(xì)胞系需要其特定的生長因子混合物

      （2）與原代細(xì)胞相比，它們的生長需要更嚴(yán)密的監(jiān)測，因為使它們無限生長的突變同時也會造成它們很快達到過度生長。因此，當(dāng)細(xì)胞系生長到了幾乎覆蓋整個培養(yǎng)器皿底部，也就是90%的密度時，細(xì)胞需要重懸洗滌用于實驗或凍存以備將來使用，或者重新接種到新的培養(yǎng)器皿進一步擴增。

       細(xì)胞傳代的基本原則
       代謝的有毒物質(zhì)會隨時間在細(xì)胞培養(yǎng)液中累積。當(dāng)擴增細(xì)胞時，尤為重要的是經(jīng)常更換培養(yǎng)液以維持細(xì)胞健康和監(jiān)測細(xì)胞擴增情況以避免細(xì)胞生長過度。傳代的細(xì)胞通常分為兩個主要類型：永生化細(xì)胞系和干細(xì)胞系。

      永生化細(xì)胞系是那些來自多細(xì)胞生物的細(xì)胞通過一些突變修飾改變了細(xì)胞周期調(diào)控從而可以無限繁殖的細(xì)胞。的永生化細(xì)胞系也許是HeLa細(xì)胞系，它是1951年取自于Henrietta Lacks女士取樣活檢的宮頸癌病變組織。
       與腫瘤永生化的細(xì)胞系相反，干細(xì)胞系通常從成人和胚胎組織的可自我更新的多能細(xì)胞中分離得到。這些細(xì)胞, 如您在短片中看到的人類胚胎干細(xì)胞 , 在適當(dāng)?shù)臈l件下也能無限傳代培養(yǎng)。
       細(xì)胞在優(yōu)化條件下可以懸浮培養(yǎng)，如從血液中分離到的永生化細(xì)胞, 或者貼壁培養(yǎng)，如許多從組織中分離的細(xì)胞系。
       貼壁細(xì)胞的生長必須仔細(xì)監(jiān)測以確保細(xì)胞保持健康。根據(jù)細(xì)胞類型，很多貼壁細(xì)胞在其達到70-90%密度，也就是覆蓋了培養(yǎng)容器表面的70-90%時需要傳代。
       這些細(xì)胞系雖然保留了原細(xì)胞源的很多特征，但是每次傳代也會使它們開始產(chǎn)生一些擴增細(xì)胞的*特性。因此，對任何一個特定細(xì)胞系，要考慮限制傳代的次數(shù)。
       傳代細(xì)胞時，使用無菌技術(shù)和合適的試劑及設(shè)備尤為重要。
       針對細(xì)胞系選擇合適的培養(yǎng)液來得到j(luò)ia的生長和擴增很關(guān)鍵。每一個細(xì)胞系都有特定的生長營養(yǎng)組分配方，但是大多數(shù)細(xì)胞系起碼需要的添加物有以下這些：血清，如胎牛血清，需熱處理滅活其胎牛成分，它為細(xì)胞生長提供重要的生長因子?？股?，如*和*用于防止細(xì)胞污染。其他的生長因子，如成纖維細(xì)胞生長因子，有助于延長細(xì)胞系的生長和擴增。不使用時，要將這些添加物或者“*”細(xì)胞培養(yǎng)液保存于4攝氏度。
       細(xì)胞換液注意事項：
       首先要注意細(xì)胞培養(yǎng)液的顏色，富含營養(yǎng)的新鮮培養(yǎng)液由于添加了pH指示劑酚紅故為透明橙色。當(dāng)細(xì)胞耗盡培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分時，開始在培養(yǎng)物中積累廢物和酸性物質(zhì)，降低pH值。

       因此，許多細(xì)胞培養(yǎng)液含有酚紅，當(dāng)培養(yǎng)物呈酸性時會將培養(yǎng)液顏色由橙色變?yōu)辄S色。培養(yǎng)液需在變黃之前更換。當(dāng)酚紅變?yōu)榉奂t色時，說明培養(yǎng)基pH偏堿，不利于細(xì)胞健康生長。這時可能需要改變二氧化碳濃度并更換培養(yǎng)液。
很多貼壁細(xì)胞系可天然附著于無涂層的塑料上。因此，塑料細(xì)胞培養(yǎng)板如培養(yǎng)皿或六孔板經(jīng)常用于傳代細(xì)胞。塑料的細(xì)胞培養(yǎng)瓶也經(jīng)常用到，如T25的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，常用于擴增培養(yǎng)數(shù)目少的細(xì)胞或者開始培養(yǎng)生長緩慢的細(xì)胞系。T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶常用在培養(yǎng)擴增速度較快的細(xì)胞系或用于生長超過T25培養(yǎng)瓶容量的大量細(xì)胞。
       在轉(zhuǎn)移貼壁細(xì)胞時，要先剪切掉細(xì)胞上與和塑料結(jié)合的蛋白。因此，消化酶*常用于消化細(xì)胞?？刂?消化的時間很重要，因為如果處理時間過長會損壞細(xì)胞表面的蛋白。
       細(xì)胞培養(yǎng)液能中和*。所以在*消化前常用磷酸緩沖液或PBS洗滌細(xì)胞。EDTA，一種鈣螯合劑有時候也用于提高*的蛋白水解功能。
       為擴增細(xì)胞克隆，將新鮮傳代的細(xì)胞培養(yǎng)于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，選擇適合該細(xì)胞生長條件，通常為溫度37度，二氧化碳5％和濕度95%。
       細(xì)胞傳代的操作步驟
       首先，重要的是要清楚細(xì)胞需要監(jiān)測的頻繁程度，這取決于該細(xì)胞的擴增速度。
       現(xiàn)在培養(yǎng)液為亮橙色，再觀察其它生長情況。如培養(yǎng)液是否渾濁-如渾濁則可能有污染, 細(xì)胞的大小和密度以及細(xì)胞的總體質(zhì)量。
       如果細(xì)胞密度達到90%，吸去細(xì)胞培養(yǎng)液，用無鈣離子和鎂離子的磷酸緩沖液洗滌。
       然后加入*，置于37攝氏度約5分鐘，確認(rèn)細(xì)胞脫壁后，加入新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液終止*的水解。
       將懸浮的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到錐形管離心。細(xì)胞離心下來后，小心棄去上清，重懸細(xì)胞于新鮮培養(yǎng)液。計數(shù)收集到的細(xì)胞然后根據(jù)合適密度接種細(xì)胞立即進行擴增或用于將來擴增。
       傳代的不同應(yīng)用：
       前面已經(jīng)提到，人胚胎干細(xì)胞是一類必須傳代的細(xì)胞。它們通常與小鼠成纖維細(xì)胞MEF共培養(yǎng)，后者能提供幫助干細(xì)胞保持其多能性的因子。
       生長于飼養(yǎng)細(xì)胞上的干細(xì)胞到了合適的發(fā)育階段時需挑出來?？捎梦⑿鸵埔汗芴舫龌蛴貌ＡЧぞ咻p輕將其刮下然后接種于新的培養(yǎng)液中進行擴增。
       有一些細(xì)胞系對酶消化敏感，或者貼壁很緊無法使用*處理來重懸。細(xì)胞刮常用來輕輕將細(xì)胞從培養(yǎng)板的底部刮下來。如果細(xì)胞貼壁特別緊，可加入培養(yǎng)液或適當(dāng)溶液后用血清吸管用力刮擦。使用該方法時要小心，細(xì)胞比較脆弱，容易在這種機械剝離的方法中受損。
       為了更快并可重復(fù)性的大量擴增細(xì)胞到超過單層培養(yǎng)瓶容量的規(guī)模，可以使用多層培養(yǎng)瓶，它的培養(yǎng)量可達單層培養(yǎng)瓶的3-5倍。