細胞培養(yǎng)基中,L-*是一種必需氨基酸,常用濃度在0.7~5 mmol/L之間。對于一些特定的細胞,也有相應(yīng)的濃度要求。例如對于dhfr-CHO細胞,*的濃度要達到4mmol/L時,方可滿足細胞的正常生長。
*不僅可作為培養(yǎng)細胞的能量來源,而且參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。許多商品化細胞培養(yǎng)基都不含*。*作為一種添加劑,常常是在培養(yǎng)基使用之前,再臨時加進去,這是什么原因呢?
圖.*分子式
原來,*在細胞培養(yǎng)基中會發(fā)生自發(fā)分解。細胞培養(yǎng)基的儲存溫度越高,存放時間越久,*分解的越快。*分解后還導致氨的形成,而氨對于細胞具有毒性。
曾有人做過測試,添加了8mM*的DMEM,在37℃存放7天后,*的濃度就下降為原先的一半(見下圖)。這也是為什么含*的培養(yǎng)基要在2-8℃保存的原因。
又有人檢測過11種商品化培養(yǎng)基中*的濃度,發(fā)現(xiàn)實際檢測的*濃度均在標示的濃度之下。有人測過4℃下*的降解速率。也是采用DMEM,培養(yǎng)時添加葡萄糖20mmol/L, 胎牛血清7%,發(fā)現(xiàn)在4℃下,大約32天后,*即下降為原先濃度的一半。
同時,對于細胞培養(yǎng)來說,*并非越高越好。當初始濃度低于5mmol/L時,*的利用率大于80%,且初始濃度越低,利用率越高;隨著初始濃度的升高,*利用率逐漸降低,當大于10mmol/L后,利用率急劇降低。
那么,對于*的降解,是否有相應(yīng)的解決辦法呢?可以使用*二肽,如甘氨酰*、丙氨酰*等。二肽形式的*十分穩(wěn)定,不會發(fā)生水解和氨的毒性堆積,又可被細胞所利用。因細胞內(nèi)的氨基肽酶能裂解二肽,逐漸釋放細胞所能利用的*和*。**的熱穩(wěn)定性解決了在培養(yǎng)基使用時才臨時加入L-*的問題,允許配好的液體培養(yǎng)基在4℃能放更長時間。
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