液相色譜儀是分析工作者常用的“一門(mén)武器”。本人工作15.5年，深感何時(shí)能將液相做到有“打游戲”感覺(jué)時(shí)，便是到了游刃有余、駕輕就熟的境界。現(xiàn)今的液相軟件均已具備了強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，如能庖丁解牛般使用，便可將此測(cè)定做到事半功倍、輕松自如。
一、水相中的溶質(zhì)溶解方式
水相中需溶解的無(wú)機(jī)鹽和表面活性劑等固體溶質(zhì)，建議采用加熱法，不建議采用振搖、超聲等方式。因此種方式的溶解，溶質(zhì)可能處于“臨界膠團(tuán)濃度”，其后一旦遇到某特殊情形(如遇有機(jī)溶劑、溫度劇降等)，極易析出少量結(jié)晶；而一旦析出，便將損傷儀器和色譜柱，呈現(xiàn)泵頭處析出“鹽和白fen”的現(xiàn)象。
二、流動(dòng)相的配制與使用
1.恒度洗脫
一定是將水相與有機(jī)相混合后、抽濾(使用混合型過(guò)濾膜)，用一個(gè)管路(如A管)泵入儀器，這是使用的原則。切勿因節(jié)約有機(jī)相、便于摸索色譜條件等原因而使用兩個(gè)管路(一個(gè)純水相、一個(gè)純有機(jī)相)泵入儀器，即便配制了脫氣機(jī)。因此種情形極易造成水相中鹽和表面活性劑的少量析出。
剩余流動(dòng)相*可繼續(xù)使用，密封后放置陰涼處；待下次試驗(yàn)時(shí)與新配制的流動(dòng)相混合后抽濾即可。無(wú)需擔(dān)心發(fā)霉、無(wú)機(jī)鹽析出、揮發(fā)、比例不準(zhǔn)等問(wèn)題，這些皆為疑神疑鬼的表現(xiàn)。實(shí)踐是檢驗(yàn)真理的標(biāo)準(zhǔn)！實(shí)踐吧~
2.梯度洗脫
流動(dòng)相配制為科學(xué)的方式是：A相為高比例的水相-低比例的有機(jī)相、B相為低比例的水相-高比例的有機(jī)相(英國(guó)藥典幾乎均如此)；其次為：A相為高比例的水相-低比例的有機(jī)相、B相為純有機(jī)相；不科學(xué)的為：A相為純水相、B相為純有機(jī)相，如既有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用了此種方式，建議改為第二種或一種方式，否則基線(xiàn)漂移嚴(yán)重，難以進(jìn)行穩(wěn)定的雜質(zhì)檢測(cè)。
梯度洗脫結(jié)束后，建議經(jīng)5分鐘回到初始狀態(tài)，再平衡5分鐘后開(kāi)始下一針測(cè)定。這10分鐘的穩(wěn)定極為關(guān)鍵。切勿短時(shí)間內(nèi)回到初始狀態(tài)，會(huì)對(duì)儀器和色譜柱損傷較大。
三、液相色譜儀色譜柱的安裝
標(biāo)準(zhǔn)SOP應(yīng)為：
取A管路放入流動(dòng)相瓶中→擰松泵頭→流速由0ml/min逐漸升至10ml/min，觀察尾液是否呈瀑布狀流出，持續(xù)10秒→擰緊泵頭→流動(dòng)相呈拋射狀從安裝色譜柱的一端噴出，觀測(cè)是否呈拋物線(xiàn)狀，持續(xù)5秒→流速逐步降至1.0ml/min→安裝色譜柱，待20秒后，流動(dòng)相從色譜柱另一端呈泉水狀涌出再安裝另一端→手握兩端螺絲帽，擰緊。
以上安裝順序遵循的是：
逐級(jí)排放氣泡和儀器內(nèi)存留的洗液，使得安裝后氣泡極難混入。本人曾試驗(yàn)梯度洗脫連續(xù)一周，一針與后一針主成分保留時(shí)間相差在6秒以?xún)?nèi)。
四、液相色譜儀試驗(yàn)后色譜柱的清洗
1.常用的C8柱、C18柱
1.1流動(dòng)相僅為乙腈-水或甲醇-水時(shí)
繼續(xù)沖洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫保持試驗(yàn)時(shí)溫度，即可。
1.2水相中有無(wú)機(jī)鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質(zhì)時(shí)
先采用純水(或含有2%甲醇)，沖洗A管路(試驗(yàn)采用哪個(gè)管路，就要從頭到尾沖洗該管路)，時(shí)間30分鐘(如流動(dòng)相中有表面活性劑，適當(dāng)增加時(shí)間)，流速1.0ml/min，柱溫可較試驗(yàn)溫度高出5~10℃；隨后更換成20%甲醇再?zèng)_洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫箱加熱裝置關(guān)閉。結(jié)束后取下色譜柱放置陰涼處。
很多同仁其后采用高比例的甲醇沖洗，實(shí)屬畫(huà)蛇添足，導(dǎo)致殘余的有機(jī)相中水相遇到高比例的甲醇后析出少量鹽和表面活性劑，從而在泵頭上、色譜柱中析出，也導(dǎo)致了色譜柱壽命大為縮短。本人曾使用過(guò)一根約2000元的色譜柱，正著用了四年、倒著用了兩年(倒著用測(cè)非有關(guān)物質(zhì))。
2.其他類(lèi)型色譜柱
查詢(xún)獲取如何科學(xué)合理地使用與清洗保存該類(lèi)型色譜柱的方法，切勿盲動(dòng)，否則導(dǎo)致色譜柱性能急劇下降。
