上市時(shí)間：2020-04-13

創(chuàng)新點(diǎn)：用途： 葡聚糖G系列凝膠產(chǎn)品屬經(jīng)典的分離純化介質(zhì)，在蛋白質(zhì)、核酸、多糖、多肽、抗體、疫苗、天然藥物等生物醫(yī)藥下游分離純化中應(yīng)用較廣。

葡聚糖凝膠G-25操作步驟由上海古朵生物提供講述，葡聚糖凝膠G-25（Sephadex G-25），吸水率是2.5mL/g干膠，葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹；G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級(jí)分離范圍也有所不同；葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

葡聚糖凝膠G-25操作步驟由上海古朵生物提供講述，葡聚糖凝膠G-25(Sephadex G-25)，吸水率是2.5mL/g干膠，葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹；G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級(jí)分離范圍也有所不同；葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

葡聚糖凝膠G-25操作步驟

【操作步驟】

1、葡聚糖凝膠預(yù)處理：在室溫下，將葡聚糖凝膠干粉浸泡于蒸餾水中至少24小時(shí)，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，或者用蒸餾水煮沸至少1小時(shí)直至充分溶脹，凝膠體積不再變化。
注：在溶脹前，加入蒸餾水?dāng)嚢韬笫蛊渥匀怀两担两岛笕羯蠈尤芤褐衅〉哪z碎片顆粒較多，需要重復(fù)多次漂洗將其除去，防止層析時(shí)阻塞凝膠柱，影響流速。
2、裝柱：將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層;裝柱要均勻，可在凝膠耐受的操作壓下裝柱，裝好的凝膠柱可以檢測(cè)柱效，檢測(cè)過(guò)濾柱裝填是否合格。
凝膠層析分離度取決于柱高，為分離不同組分，凝膠柱床必須有適宜的高度：分級(jí)分離時(shí)，一般需要 100cm 左右長(zhǎng)的層析柱，柱高與直徑之比為 20:1-100:1，柱高過(guò)高時(shí)，凝膠擠壓變形阻塞會(huì)引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免;分組分離(例如脫鹽)時(shí)用短柱，柱高控制在40-50cm 以下，柱高與直徑的比約為 5:1-10:1。
3、平衡：上樣前用平衡液平衡層析柱至少3-5個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)。
4、上樣：分級(jí)分離時(shí)上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整，脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積;樣品溶液如有雜質(zhì)或沉淀應(yīng)過(guò)濾或離心除去，樣品的粘度不能過(guò)高，否則影響分離效果。
5、洗脫方法:可以用無(wú)鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫;在上柱緩沖液中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。
6、在位清洗(CIP)：凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白;方法是以40cm/h用1M氫氧hua鈉反向清洗四個(gè)柱體積，再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。
7、保存：凝膠柱暫時(shí)不用，可將其回收，一般方法是將凝膠用水沖洗干凈濾干，可加入0.02%疊氮hua鈉防腐或用20%乙醇浸泡，以控制微生物生長(zhǎng)。
 

【注意事項(xiàng)】

1、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2、請(qǐng)嚴(yán)格按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的要求進(jìn)行歸范化操作。
3、避免直接接觸終止液和底物，如不小心接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
4、注意無(wú)菌操作，避免微生物污染。
5、試劑對(duì)于不同實(shí)驗(yàn)不必全部使用，在實(shí)驗(yàn)條件成熟后可以不必使用。

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標(biāo)簽：葡聚糖凝膠G-25操作步驟