紅細胞裂解液配制方法由上海古朵生物提供，產(chǎn)品名稱：紅細胞裂解液，供應(yīng)商：古朵生化試劑廠家，
規(guī)格：100ml/500ml，分類：細胞組分分離，儲存條件：4℃,12個月，用途：去除細胞懸液中的紅細胞,屬于溶解紅細胞方法的一種

　　紅細胞裂解液配制方法，操作步驟，使用方法及其他咨訊由上海古朵生物提供講述，本司現(xiàn)貨供應(yīng)ELISA試劑盒，動物血清，標準品，對照品，培養(yǎng)基，抗體，抗原，染色液，溶液，緩沖液，裂解液，生化試劑，化學試劑，生物分子，微生物，實驗耗材，其他試劑等，品種齊全，價格實惠，歡迎訂購!

?紅細胞裂解液配制方法

　　【信息說明】

　　產(chǎn)品名稱：紅細胞裂解液

　　供應(yīng)商：古朵生化試劑廠家

　　規(guī)格：100ml/500ml

　　分類：細胞組分分離

　　儲存條件：4℃,12個月

　　用途：去除細胞懸液中的紅細胞,屬于溶解紅細胞方法的一種

　　注意事項：無菌溶液。注意無菌操作,經(jīng)過濾除菌處理。

　　【簡介說明】

　　紅細胞裂解液是一種用于從人或鼠等的血液或組織樣品中裂解并去除無細胞核紅細胞的溶液。在裂解紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞或其它有細胞核的細胞。本裂解液不適用于有細胞核紅細胞的裂解，例如鳥或禽類的紅細胞。

　　本裂解液經(jīng)過無菌處理，處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。

　　【操作步驟】

　　1、新鮮組織經(jīng)過膠原酶或*等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

　　2、對于0.2mL細胞沉淀加入1mL紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4~5min。

　　3、加入15~20mL PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。

　　4、1000g離心5min，棄紅色上清。

　　5、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

　　6、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。

　　說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程中的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。

　　【配制方法】

　　1、試劑配制

　　原液1號：10 g葡萄糖+0.6 g磷酸二氫鉀+3.58 g*(7H2O)+20 ml 5 g/L酚紅溶液，加雙蒸水定容至1 000 ml。

　　原液2號：1.86 g氯化鈣(2H2O)+4.0 g氯化鉀+80 g氯化鈉+1.04 g氯化鎂+2.0 g*(7H2O)，加雙蒸水定容至1 000 ml。

　　應(yīng)用液有3種，1#：10 ml原液1號+10 ml原液2號，加雙蒸水定容至100 ml。

　　2#：20 ml原液1號+20 ml原液2號，加雙蒸水定容至100 ml。

　　3#：1 ml原液1號+1 ml原液2號，加雙蒸水定容至100 ml。

　　2、紅細胞裂解

　　取100 μl抗凝全血，加2 ml應(yīng)用液3#，混勻15～20 s;加2 ml應(yīng)用液2#，混勻15～20 s;加4 ml應(yīng)用液1#，混勻15～20 s;300×g離心2 min，棄上清;收集沉淀，加PBS緩沖液，制成白細胞懸液，備用。

　　(這種紅細胞裂解法滿足了白細胞流式細胞儀檢測分選要求，價格低廉，是一種簡便快捷、經(jīng)濟實用的白細胞純化分選方法。

　　3、紅細胞裂解液(0.01mol/L Tris-HCL pH7.6; 0.01mol/L NaCl; 0.005mol/L MgCl2)

　　4、紅細胞裂解液(139.6 mmol/L NH4Cl, 16.96 mmol/L Tris, 用1 mol/L HCl調(diào) pH至7.2)

　　5、紅細胞裂解液的制備：碳酸氫鉀(KHCO3)1.0g;氯化氨(NH4CL)8.3g;EDTA-Na2 0.037g，加雙蒸水至1000ml，即工作液。

　　【使用方法】

　　一、組織細胞樣品：

　　1、新鮮組織經(jīng)*或膠原酶等消化分散成單個細胞懸液，離心棄去上清液;

　　2、從4℃冰箱中取出ELS裂解液，按1:3-5的比例向細胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml細胞壓積加入3-5ml裂解液)，輕輕吹打混勻;

　　3、800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液;

　　4、收集沉淀部分，加入Hank’s液或無血清培養(yǎng)液離心洗2-3次;

　　5、如裂解不*可重復(fù)步驟2和3;

　　6、重懸細胞，用于后續(xù)實驗;如提取RNA，是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液中進行。

　　二、血細胞：

　　1、新鮮抗凝血，離心棄去上清液;

　　2、取出4℃冰箱預(yù)冷的ELS裂解液，按1:6-10的比例向細胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml細胞壓積加入6-10ml裂解液)，輕輕吹打混勻;

　　3、800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液;

　　4、收集沉淀部分，加入Hank’s液或無血清培養(yǎng)液離心洗2-3次;

　　5、如裂解不*可重復(fù)步驟2和3;

　　6、重懸細胞，用于后續(xù)實驗;如提取RNA，是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液進行。

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