人IL-10檢測(cè)試劑盒（ELISA）
ELISA操作顯色過(guò)程常見問(wèn)題及解答
1） 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑；
2） 使用變質(zhì)的顯色劑。
1.未使用完畢的顯色劑返回原瓶造成污染，顯色反應(yīng)不避光，或有陽(yáng)光直射。
解決辦法：
1） 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；
2） A、B 液應(yīng)避免接觸金屬器械。
1.使用量根據(jù)樣本需要量取，取出后未使用完畢的顯色液應(yīng)棄去，不能再次返回原試劑瓶，以免造成顯色液污染，影響下次使用；TMB對(duì)光敏感，一般顯色反應(yīng)要避光進(jìn)行；
通用名稱：人IL-10檢測(cè)試劑盒（ELISA法）
英文名稱：RayBio® Human IL-10 ELISA Kit
公司品牌：美國(guó)Raybio
儲(chǔ)存條件：2-8℃
檢測(cè)方法：ELISA方法
預(yù)期用途：僅用于科研，體外檢測(cè)使用
參考價(jià)格：詢價(jià)
產(chǎn)品貨號(hào)：EIH-IL-10
產(chǎn)品規(guī)格：96T
檢測(cè)樣本：血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液
供應(yīng)商家：深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司
IL-10elisa檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品規(guī)格
96T
IL-10elisa檢測(cè)試劑盒預(yù)期用途
RayBio®人IL-10 ELISA試劑盒采用體外酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，定量測(cè)定人血清血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-10的含量。
人IL-10檢測(cè)試劑盒簡(jiǎn)介
人IL-10由活化的CD8（+）外周血T細(xì)胞，抗原特異性和多克隆激活后的T輔助CD4（+）T細(xì)胞克隆，B細(xì)胞淋巴瘤和由細(xì)菌脂多糖和肥大細(xì)胞激活后的單核細(xì)胞產(chǎn)生。 IL-10是同型二聚體蛋白質(zhì)，其亞基長(zhǎng)度為160個(gè)氨基酸。 人IL-10與鼠IL-10顯示73％的氨基酸同源性。 IL-10在T細(xì)胞的Th1T輔助細(xì)胞亞群中抑制許多細(xì)胞因子如IL-2和TNF-β的合成，但不抑制Th2T輔助細(xì)胞的合成。 IL-10還在輔助細(xì)胞存在下抑制有絲分裂原或抗CD3誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖，并減少IFN-γ和IL-2的產(chǎn)生。
人IL-10檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理
人IL-10檢測(cè)試劑盒使用包被有人IL-10特異性抗體的96孔酶標(biāo)板，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品被加入到孔中，樣品中存在的IL-10通過(guò)固相的抗體與孔結(jié)合。洗滌后加入*化的抗人IL-10抗體。 洗去未結(jié)合的*化抗體后，將HRP-標(biāo)記的*加入到到孔中。 再次洗滌板孔，向孔中加入TMB底物溶液，底物顯色與所結(jié)合的IL-10量成比例。 加入終止液顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色，并且在450nm處測(cè)量顏色的吸光度值。
人IL-10檢測(cè)試劑盒存儲(chǔ)
人IL-10檢測(cè)試劑盒可在-20°C下保存，從裝運(yùn)之日起存放可長(zhǎng)達(dá)1年。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。 試劑盒可以在4℃下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月。 對(duì)于更長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存時(shí)，建議儲(chǔ)存在-80°C。 該試劑盒組分見下表
人IL-10檢測(cè)試劑盒組成成分
| 組分 | 表述 | 儲(chǔ)存/預(yù)準(zhǔn)備后穩(wěn)定性 |
| IL-10酶標(biāo)板（項(xiàng)目A） | 12*8=96孔，包被有抗人IL-10抗體 | 4℃ 1個(gè)月 |
| 濃縮洗滌液（20x）（項(xiàng)目B） | 20x濃縮溶液 25ml | 4℃ 1個(gè)月 |
| 標(biāo)準(zhǔn)蛋白（項(xiàng)目C） | 2瓶人類IL-10。1個(gè)小瓶就夠配制每個(gè)一式兩份的標(biāo)準(zhǔn)品。 | -80℃1周 |
| 檢測(cè)抗體IL-10（項(xiàng)目F） | 2瓶*化的抗人IL-10。
每個(gè)小瓶足以測(cè)定微板的一半。 | 4℃ 5天 |
| 濃縮HRP-鏈霉親和素（項(xiàng)目G） | 200μl 200X濃縮HRP綴合鏈霉親和素 | 不能保存和重新使用 |
| 一步法TMB底物（項(xiàng)目H） | TMB溶液12ml | N/A |
| 終止液（項(xiàng)目I） | 8ml 0.2M硫酸 | N/A |
| 測(cè)定稀釋劑A（項(xiàng)目D） | 30ml稀釋緩沖液， | N/A |
| 測(cè)定稀釋劑B（項(xiàng)目E） | 15ml 5X濃縮液 | 4℃ 1個(gè)月 |
| 將未使用的板條重新裝回到含有干燥劑包的袋中，沿著整個(gè)邊緣重新密封。 |
人IL-10檢測(cè)試劑盒檢測(cè)步驟
1.使用前將所有試劑和樣品置于室溫（18 - 25ºC）。建議所有標(biāo)準(zhǔn)和樣品至少重復(fù)一次。
2.根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)標(biāo)記可拆卸的8孔條。
3.分別加入樣品和每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品100μl（參見試劑制備步驟3）到適當(dāng)?shù)陌蹇字小Ｉw上蓋子，室溫溫和振蕩孵育2.5小時(shí)
4.棄去溶液，用1X洗滌液洗滌4次。使用多通道移液器或自動(dòng)洗板機(jī)洗板，每孔加入洗滌緩沖液（300μl）。每個(gè)步驟中去除液體對(duì)于良好的性能是至關(guān)重要的。洗完后，通過(guò)吸取或傾析清除任何剩余的洗滌緩沖液。倒置板并用干凈的吸水紙吸干印跡。
5.每孔加入100μl1X制備的*化抗體（試劑制備步驟6）。在室溫下溫和振蕩孵育1小時(shí)。
6.棄去溶液。重復(fù)洗滌，如步驟4。
7.加入100μl制備的鏈霉親和素溶液（見試劑制備步驟7）。在室溫下溫和搖動(dòng)孵育45分鐘。
8. 棄去溶液。 重復(fù)洗滌，如步驟4。
9.向每個(gè)孔中加入100μlTMB一步底物試劑（項(xiàng)目H）。在室溫下在黑暗中輕輕振蕩孵育30分鐘。
10.向每個(gè)孔中加入50μl終止液（項(xiàng)目I）。 立即讀取450 nm處吸光度值。
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