SYBR Green Master Mix
快速熒光定量PCR試劑盒（SYBR Green）
別名：SYBR Green熒光定量PCR預(yù)混液
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本產(chǎn)品是使用SYBR® Green I嵌合熒光法進(jìn)行qPCR反應(yīng)的專用預(yù)混液。核心組分為一種新型的抗體法熱啟動(dòng)DNA聚合酶，具有特異性強(qiáng)、檢測(cè)靈敏度高等諸多優(yōu)點(diǎn)，配以針對(duì)qPCR優(yōu)化的*適Buffer，非常適合于進(jìn)行高特異性、高靈敏度的qPCR反應(yīng)。本產(chǎn)品是一種含有qPCR反應(yīng)*適濃度SYBR® Green I的2×預(yù)混液，可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)靶基因定量準(zhǔn)確、重復(fù)性好、可信度高。同時(shí)，優(yōu)化的預(yù)混液可縮短Real-Time PCR的反應(yīng)時(shí)間，適用于標(biāo)準(zhǔn)或快速PCR儀。
保存條件：
收到本產(chǎn)品后， 請(qǐng)立即置于-20 ℃ 避光保存,一年有效。從-20 ℃ 取出使用時(shí)， 將凍存的qPCR MasterMix和ROX Reference Dye融解，然后輕輕顛倒混勻，待溶液*均一后再行使用。如解凍后沒(méi)有使用，須*混勻后重新冷凍。(在解凍過(guò)程中鹽會(huì)出現(xiàn)分層現(xiàn)象，如未混勻進(jìn)行冷凍，鹽晶體的析出將會(huì)對(duì)酶造成損害)。如需一段時(shí)間內(nèi)經(jīng)常取用，可在2～8℃條件下儲(chǔ)存3個(gè)月。避免反復(fù)多次凍融。
使用說(shuō)明：
一、配制 Real-Time PCR反應(yīng)體系：
1.、將所有試劑qPCR MasterMix，ROX Reference Dye，模板，引物和RNase-Free ddH2O，在室溫下溶解并*混勻。
2、建議置于冰上進(jìn)行Real-Time PCR反應(yīng)液的配制。
3、蓋上反應(yīng)管，輕柔混勻。可瞬時(shí)離心，確保所有樣品均在管底。
二、進(jìn)行Real-Time PCR反應(yīng)
建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)。
若模板量較低等因素導(dǎo)致擴(kuò)增效果不佳，可使用三步法程序進(jìn)行PCR反應(yīng)。
幾種常見(jiàn)儀器的*適ROX Reference Dye濃度見(jiàn)下表：
儀器型號(hào) | 使用濃度 |
ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/StepOne等 | 5×（20ul體系加2ul，50ul體系加5ul） |
ABI 7500/7500 Fast、QuantStudio ® 3/5、QuantStudio 6/7 Flex、ViiA 7、Stratagene Mx3000P/Mx3005P和Mx4000等 | 1×（20ul體系加0.4ul，50ul體系加1ul） |
Roche、Bio-Rad等品牌儀器 | 無(wú)需添加 |
常見(jiàn)問(wèn)題:見(jiàn)說(shuō)明書
注意事項(xiàng)：
1、本產(chǎn)品中含有熒光染料SYBR Green I，保存本產(chǎn)品或配制PCR反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。
2、如果試劑沒(méi)有混勻，其反應(yīng)性能會(huì)有所下降。使用時(shí)請(qǐng)上下顛倒輕輕混勻，請(qǐng)不要使用振蕩器進(jìn)行混勻，盡量避免出現(xiàn)泡沫，并經(jīng)瞬時(shí)離心后使用。
3、引物純度對(duì)反應(yīng)特異性影響很大，建議使用PAGE級(jí)別以上純化的引物。
4、引物終濃度為0.3 μM可以在大多數(shù)體系中獲得良好的擴(kuò)增結(jié)果。如果需要進(jìn)一步優(yōu)化，可以在 0.2-0.5 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
5、20 μl反應(yīng)體系中，cDNA模板的使用量一般小于100 ng，基因組DNA模板量一般小于50 ng，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為模板時(shí)，使用量應(yīng)不超過(guò)PCR體系終體積的20%。
6、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
