Y蛋白酶Trypsin-EDTA消化液(0.25%) 含酚紅
在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養(yǎng)中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為Trypsin,EDTA 等,其功能主要是使細胞間的蛋白質(zhì)(如細胞外基質(zhì))水解,使組織或貼壁細胞分散成單個細胞,制成細胞懸液用于進一步的實驗。
索萊寶生產(chǎn)的Y蛋白酶Trypsin-EDTA消化液(0.25%) 含酚紅含 0.25%*酶和 0.02%EDTA(0.53mM),溶于無鈣鎂鹽溶液中,經(jīng)過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細胞和組織的消化。本產(chǎn)品具有方便快速、穩(wěn)定安全、細胞狀態(tài)好等特點。通常室溫消化 2 分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細胞。Trypsin-EDTA 消化液有含酚紅和不含酚紅 2 類產(chǎn)品,酚紅具有 pH 指示作用。
保存:-20℃保存,有效期 12 個月。
使??法:
1. 貼壁細胞的消化:
a) 吸去培養(yǎng)液,用無菌的 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
b) 加入少量Trypsin-EDTA 消化液,蓋過細胞即可,室溫放置 1-2 分鐘。不同的細胞消化時間有所不同,對于貼壁牢固的細胞可適當(dāng)延長消化時間。
c) 顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除消化液。加入含血清的細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
d) 如果發(fā)現(xiàn)消化不足,可加入Trypsin-EDTA 消化液重新消化。
e) 如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用pancreatin細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g 離心 1 分鐘,沉淀細胞,盡量去除pancreatin細胞消化液后,加入含血清的培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2. 組織的消化:不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。