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在分子生物學(xué)中紫外分光光度計有哪些應(yīng)用?

   2021年03月05日 15:14  
  分子生物學(xué)是在分子水平研究蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子結(jié)構(gòu)與功能的學(xué)科,是生物學(xué)的前沿領(lǐng)域。分子生物學(xué)的研究需要對生物大分子進(jìn)行檢測,常用的儀器包括PCR儀、核酸提取儀等。除了專門的分子生物學(xué)儀器,通用的化學(xué)分析儀器也在分子生物學(xué)中有廣泛的應(yīng)用,比如紫外分光光度計。
 
  紫外分光光度計在分子生物學(xué)中主要有以下幾點(diǎn)應(yīng)用:
 
  1.蛋白質(zhì)含量測定
 
  (1)直接定量法:
 
  利用紫外分光光度計直接定量檢測蛋白質(zhì)含量是利用蛋白質(zhì)含有的*和*在紫外光區(qū)280 nm處具有大吸收的特征,根據(jù)該波長的吸光度與蛋白質(zhì)濃度成正比的關(guān)系測定其含量。
 
  直接定量法適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。特點(diǎn)在于快速簡便,缺點(diǎn)包括易受到平行物質(zhì)如DNA的干擾、敏感度差、要求蛋白的濃度較高等。
 
  (2)比色法:蛋白質(zhì)的組成成分氨基酸與外加的顯色基團(tuán)或染料反應(yīng),產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物的濃度與氨基酸的數(shù)量相關(guān),從而反映蛋白質(zhì)濃度。常見方法包括BCA、Bradford、Lowry等幾種。
 
  2.核酸濃度測定和純度判定
 
  核酸的大吸收波長是260 nm,蛋白質(zhì)的大吸收波長是280 nm。在波長260 nm的紫外線下,1 OD值光密度相當(dāng)于約50 μg/mL雙鏈DNA,約40 μg/mL單鏈DNA或RNA。通過OD260與OD280的比值還可初步判斷核酸的純度,純DNA和RNA樣品的0D260/280分別為1.8和2.0,若樣品中有蛋白質(zhì)或酚的污染,比值將低于此值。
 
  紫外分光光度計一般只能測定質(zhì)量濃度大于0.25 μg/mL的核酸濃度。
 
  3.細(xì)菌密度測定
 
  通常情況下,根據(jù)經(jīng)驗和目測推斷細(xì)菌的生長密度和生長期,而OD600是用來檢測細(xì)菌濃度的重要指標(biāo),是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標(biāo)準(zhǔn)方法。實驗中以未加菌液的培養(yǎng)液作為空白液,再定量培養(yǎng)后的含菌培養(yǎng)液。注意受試的樣品不能離心,要保持細(xì)菌懸浮狀。
 
  紫外分光光度法是基礎(chǔ)的光譜分析方法,根據(jù)被測量物質(zhì)分子對紫外-可見波段范圍單色輻射的吸收或反射強(qiáng)度來進(jìn)行物質(zhì)的定量、定性或結(jié)構(gòu)分析。紫外分光光度法的應(yīng)用很廣泛,可用于化學(xué)、材料、生物、醫(yī)學(xué)、食品、環(huán)境等領(lǐng)域。分子生物學(xué)中的應(yīng)用是指其中的一小部分。
 

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