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吖啶酯(NSP-SA-NHS)的穩(wěn)定性及注意事項(xiàng)

來(lái)源: 湖北新德晟材料科技有限公司    2021年07月07日 09:39  

 吖啶酯(NSP-SA-NHS)CAS:199293-83-9和相關(guān)化合物已被證明是非常有優(yōu)勢(shì)的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物,穩(wěn)定性,活性和敏感性超過(guò)了那些放射性同位素。在堿性條件下,NHS將會(huì)離去,吖啶酯將會(huì)以一個(gè)穩(wěn)定的酰胺鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合形成吖啶化合物。反應(yīng)完成后,多余的吖啶鹽通過(guò)脫鹽柱除去。在存在堿性過(guò)氧化氫,吖啶標(biāo)記的蛋白不需要酶催化可自行發(fā)光。加入激發(fā)試劑后,體系立即釋放光子,可以用430nm標(biāo)準(zhǔn)光度計(jì)檢測(cè)。這個(gè)發(fā)光過(guò)程是十分短暫(整個(gè)過(guò)程的發(fā)生小于2秒),觸發(fā)方案必須增加內(nèi)部光度計(jì)和光子探測(cè)器。蛋白質(zhì),多肽,抗體,核酸都可以用吖啶標(biāo)記。標(biāo)記化合物在堿性過(guò)氧化氫的激發(fā)下快速發(fā)光,通過(guò)收集光子可以檢測(cè)到標(biāo)記化合物。

產(chǎn)品穩(wěn)定性:
在酸性溶液中(pH<4.8)都很穩(wěn)定,與蛋白質(zhì)偶聯(lián)物在室溫下保存4周,其光量子產(chǎn)率不降低,凍干品在-20℃下,可以保存一年以上。
當(dāng)pH>4.8,尤其在堿性溶液中,吖啶化合物由于部分發(fā)生水解降低了其穩(wěn)定性,水解過(guò)程為不發(fā)光的暗反應(yīng)過(guò)程;水解程度隨pH增大而增大,隨溫度的升高而增大。
吖啶酰胺穩(wěn)定性較高于吖啶酯結(jié)構(gòu),抗水解能力較強(qiáng)。
吖啶環(huán)或酚環(huán)或苯磺酰環(huán)上連有甲基等給電基團(tuán),由于空間位阻大,熱穩(wěn)定性增加;連有吸電子基團(tuán),有利于親核取代反應(yīng)而使其穩(wěn)定性下降。
建議:偶聯(lián)后保存用的緩沖液盡量用弱酸性的緩沖液,鼓氮?dú)獬テ渲械难鯕?。密封避光低溫保存。有條件的可以制成凍干樣再保存。
注意事項(xiàng):
吖啶酯除了DMF,也可以用無(wú)水DMSO等非質(zhì)子性溶劑來(lái)溶解。通常吖啶酯用DMF較高溶解的濃度為4mM (約2.7mg/ml),我司生產(chǎn)的吖啶酯中DMSO中溶解度可達(dá)10mg/ml。
標(biāo)記前,由于吖啶酯末端羧基經(jīng)NHS活化,較為活潑,請(qǐng)用非質(zhì)子性的干燥無(wú)水溶劑來(lái)溶解;標(biāo)記后,標(biāo)記后吖啶酯與被標(biāo)記物之間以酰胺鍵或者酯鍵等形式存在,酸性溶劑基本沒(méi)有影響;吖啶酯本身活性位點(diǎn)在堿性和氧化環(huán)境下不穩(wěn)定,因此應(yīng)根據(jù)被標(biāo)記物的穩(wěn)定性配制相應(yīng)的非強(qiáng)堿性非氧化的體系中處理和保存。
發(fā)光標(biāo)記物在光照條件下有可能部分分解,以致影響發(fā)光效果。吖啶酯的實(shí)驗(yàn)操作和儲(chǔ)存建議避光條件下處理,目前暫時(shí)沒(méi)有具體的研究數(shù)據(jù)。
吖啶酯標(biāo)記蛋白等大分子化合物建議用G25脫鹽柱分離;吖啶酯標(biāo)記小分子化合物建議用柱層析分離;
吖啶酯發(fā)光過(guò)程是十分短暫(整個(gè)過(guò)程的發(fā)生小于2秒),觸發(fā)方案必須增加內(nèi)部光度計(jì)和光子探測(cè)器;另外,本產(chǎn)品也可以使用配備自動(dòng)進(jìn)樣器的多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行發(fā)光數(shù)據(jù)采集,較大限度降低加樣時(shí)間對(duì)采集信號(hào)的影響。

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