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脈沖電泳儀的原理與操作

   2021年08月05日 11:40  
  脈沖場電泳是一種分離大分子DNA的方法,脈沖電泳儀能選擇0°-360° 內(nèi)的任何脈沖角度, 用一個(gè)系統(tǒng)就能完成染色體和質(zhì)粒DNA 的快速分離。  通過逐漸改變電泳過程中的轉(zhuǎn)換時(shí)間來轉(zhuǎn)換時(shí)間梯度,從而增加片段遷移率。 另外, 每個(gè)載體均可設(shè)置電壓及轉(zhuǎn)換時(shí)間。 一個(gè)電泳最多能融合8 個(gè)不同的階段,以優(yōu)化樣品中亞組分片段的分離。
 
  脈沖電泳儀工作的原理
 
  脈沖電泳儀采用旋轉(zhuǎn)脈沖場,電極安置在轉(zhuǎn)子上,由轉(zhuǎn)子帶動(dòng)電極以任意角度旋轉(zhuǎn),產(chǎn)生均一的重復(fù)電場。在脈沖場凝膠電泳中,電場不斷在兩種方向(有一定夾角,而不是相反的兩個(gè)方向)變動(dòng)。由于DNA分子帶有負(fù)電荷,會(huì)朝正極移動(dòng)。相對(duì)較小的分子在電場轉(zhuǎn)換后可以較快轉(zhuǎn)變移動(dòng)方向,而較大的分子在凝膠中轉(zhuǎn)向較為困難。因此小分子向前移動(dòng)的速度比大分子快,最終達(dá)到分離的目的。
 
  脈沖電泳儀*新穎的脈沖場設(shè)計(jì),由轉(zhuǎn)子帶動(dòng)電極以任意角度旋轉(zhuǎn),產(chǎn)生均一的重復(fù)電場,分離范圍大,可分離長達(dá)8Mb的DNA片段。同時(shí)具有較高的分辨率高,可輕易地分辨線性和環(huán)狀的DNA,對(duì)大的環(huán)狀DNA分離效果更佳。
 
  脈沖電泳儀的基本操作
 
  脈沖電泳儀的使用分為電泳前與電泳后,電泳前半小時(shí)需要檢查冷凝系統(tǒng),確認(rèn)管道連接密閉,不漏氣。然后在電泳槽內(nèi)加入約2.2升合適的電泳液。 最后接通主機(jī)和冷凝泵電源,開啟主機(jī)開關(guān),主機(jī)自檢結(jié)束后,開啟冷凝系統(tǒng)開關(guān)按“set temp”鍵調(diào)節(jié)需要的電泳溫度,按“actual temp”顯示實(shí)際溫度。調(diào)節(jié)泵的速度為“100”左右。
 
  半小時(shí)后操作者需要將加好樣的凝膠連同底座一起放入電泳槽內(nèi)的黑色方框內(nèi),并保證電泳液超過膠面1~2mm,蓋好電泳槽蓋,將冷凝泵速度調(diào)節(jié)至“50”,以防凝膠被沖走。 并且在主機(jī)上設(shè)置電泳程序,按“start”鍵,即可進(jìn)行電泳。此時(shí)可觀察到電泳槽內(nèi)電極開始出現(xiàn)氣泡。
 
  電泳開始后,“high voltage”燈亮,此時(shí)切不可打開電泳槽蓋進(jìn)行操作,以免發(fā)生觸電危險(xiǎn)。 電泳結(jié)束后,“high voltage”燈滅。先依次關(guān)掉冷凝系統(tǒng),主機(jī)開關(guān),然后可取出凝膠,最后放出使用過的電泳液。若長時(shí)間不用,需用蒸餾水沖洗電泳液循環(huán)系統(tǒng),晾干。
 
  目前,脈沖電泳儀已經(jīng)被廣泛應(yīng)用到生物、微生物種系鑒定、分子流行病學(xué)的研究、基因組文庫或大片段質(zhì)粒研究、基因物理圖譜繪制以及DNA的損傷和修復(fù)等研究當(dāng)中。該設(shè)備的電泳槽、脈沖角度、時(shí)間轉(zhuǎn)換梯度等要素都是選擇產(chǎn)品時(shí)的重要參考因素。

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