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中醫(yī)中有望聞問(wèn)切，聞診這種說(shuō)法，就是通過(guò)聲音和氣味診斷疾病。聽(tīng)著非常邪乎，聞一下怎么就能看病了呢？

中醫(yī)“聞診”就是通過(guò)聲音和氣味診斷疾病。隨著西醫(yī)發(fā)展至今，才揭示了其背后真正的奧妙——呼出氣中含有多種揮發(fā)性有機(jī)物VOCs（如脂族化合物、醇、醛、酮、胺及鹵代化合物），通過(guò)對(duì)不同疾病相關(guān)的生物標(biāo)志物的檢測(cè)，輔助疾病的早期診斷，早發(fā)現(xiàn)早干預(yù)早治療。

案例一：“葡萄狀”氣味的2-氨基苯乙酮

如感染銅綠假單胞菌的患者呼出氣會(huì)釋放一種“葡萄狀”氣味分子2-氨基苯乙酮[1]。

案例二：“爛蘋(píng)果味”的丙酮

糖尿病酮癥酸中毒的病人呼出氣體中常常伴有“爛蘋(píng)果味”，這其實(shí)是呼出氣中含有丙酮含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高出正常人。丙酮是糖尿病患者呼出氣的生物標(biāo)志物，也是一種VOCs。

到底什么是呼出氣VOCs？

呼出氣VOCs是指人體呼出，沸點(diǎn)介于50-260℃之間的揮發(fā)性有機(jī)化合物，分為外源性VOC和內(nèi)源性VOC。

外源性VOC可以產(chǎn)生于環(huán)境大氣中，通過(guò)呼吸道或皮膚吸入或者吸煙后，同樣會(huì)產(chǎn)生VOCs。而內(nèi)源性VOC則產(chǎn)生于身體各個(gè)部位細(xì)胞的生化反應(yīng)，反應(yīng)了身體的新陳代謝，這部分的VOCs主要來(lái)源于肺泡，所以肺泡的呼出氣中的生物標(biāo)志物更能反應(yīng)身體的疾病情況。

那怎么才能采集到肺泡部分的揮發(fā)性有機(jī)物VOCs呢？可以根據(jù)不同的呼吸階段CO2分壓值的不同來(lái)區(qū)分。

人呼出的氣可以分為不同階段

人正常呼吸的全部氣體是呼出混合氣，大致可分為三個(gè)階段，第I階段為呼吸道內(nèi)的死腔氣，基本不含二氧化碳，第II階段為肺泡和腔的混合氣，第III階段是肺泡氣，二氧化碳值較高。所以可根據(jù)二氧化碳的分壓值，識(shí)別呼吸階段以及控制肺泡取樣。

（圖1中表示：I+II+III 期=呼氣期（“混合呼氣期”，III 期=肺泡氣期。PetCO2=呼氣末二氧化碳分壓）

                            圖1：不同呼吸階段的二氧化碳分壓值

                   圖來(lái)源：Elsevier Science & Technology Journals（2004）

由于對(duì)呼吸采樣標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有嚴(yán)格要求，目前很多研究使用的仍然是整個(gè)呼氣的采樣（混合呼氣）。由于混合呼吸會(huì)有污染物的影響，而肺泡氣中的VOCs濃度比混合呼出氣的高出兩倍，污染物的濃度也比混合呼氣樣低。因此，對(duì)呼出氣的不同階段進(jìn)行取樣，不僅可以提高呼氣分析的可靠性，還可以幫助確定呼氣生物標(biāo)志物的來(lái)源。

呼吸氣采樣的便捷性和非侵入性（Non-Invasive），可以頻繁重復(fù)檢測(cè)，對(duì)患者和采集樣本的工作人員沒(méi)有任何風(fēng)險(xiǎn)，呼吸VOCs分析有望成為一種新型的診斷工具。

呼吸采樣分析挑戰(zhàn)在于如何收集肺泡氣

Sampling case-B氣體采樣器可在護(hù)理點(diǎn)進(jìn)行直接肺泡取樣，無(wú)需任何額外的采樣、儲(chǔ)存或預(yù)濃縮步驟。

采樣前，設(shè)置CO2閾值，以便區(qū)分呼吸周期的吸氣期和肺泡期。一旦超過(guò)閾值，閥門(mén)將會(huì)打開(kāi)，呼出的肺泡氣體將被自動(dòng)收集到一種帶填料的捕集針被吸附——Needle trap 動(dòng)態(tài)捕集針。采樣原理圖如圖2，這樣可以準(zhǔn)確地識(shí)別呼吸周期的肺泡期和吸氣期。

                  圖2：二氧化碳自動(dòng)控制動(dòng)態(tài)針捕集呼吸采樣裝置

應(yīng)用案例：

Needle trap動(dòng)態(tài)捕集針技術(shù)在護(hù)理

點(diǎn)呼吸采樣

實(shí)驗(yàn)步驟：

●   采樣方式:豬肺泡呼吸樣本通過(guò)手動(dòng)和自動(dòng)肺泡采樣的兩種采樣方式。

●   動(dòng)物接受了血管外科的手術(shù)以研究脊髓缺血的影響。分別從麻醉誘導(dǎo)后、手術(shù)準(zhǔn)備后、脊髓動(dòng)脈，夾閉后5min取標(biāo)本。異丙酚誘導(dǎo)維持麻醉。

●   樣品體積為20毫升，每次取樣時(shí)用每種取樣方法重復(fù)兩次。在這些實(shí)驗(yàn)中只使用了定制的NT，填料為2 cm的甲基丙烯酸和乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚物。

                              圖3：手動(dòng)采樣

                         圖4：自動(dòng)肺泡采樣

最終結(jié)果

                        圖5：手動(dòng)和自動(dòng)采樣的比較

當(dāng)自動(dòng)取樣時(shí)，峰面積要高得多。這些結(jié)果表明，自動(dòng)采樣，特別是在高呼吸頻率下，比人工采樣更有效。（如圖5所示）

所以，Needle trap動(dòng)態(tài)捕集針技術(shù)為氣態(tài)基質(zhì)中的痕量分析提供了一種全新的、強(qiáng)有力的樣品制備方式。

                        圖6：Needle trap動(dòng)態(tài)捕集針技術(shù)

Needle trap動(dòng)態(tài)捕集針技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：

●   靈敏度高，適用于痕量級(jí)別的氣體分析，減少采樣時(shí)間和體積；

●   結(jié)合采樣器可實(shí)現(xiàn)直接肺泡采樣，容易儲(chǔ)存和運(yùn)輸；

●   解析速率快，直接進(jìn)樣口分析，無(wú)需冷阱聚焦；

●   可復(fù)合多種吸附劑，適用不同化合物。

參考文獻(xiàn)

[1] 呼出氣分析在肺炎病原體診斷中的研究進(jìn)展.

[2] Microextraction techniques in breath biomarker analysis. Bioanalysis (2014) 6(9), 1275–1291

[3] Analytical Chemistry, Vol. 81, No. 14, July 15, 2009

[4] Anal Bioanal Chem (2013) 405:3105–3115 DOI 10.1007/s00216-013-6781-9