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簡(jiǎn)單的總結(jié)和收集了一些關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)中，常出現(xiàn)的些技術(shù)問(wèn)題，希望對(duì)大家有幫助：

1. 液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？
  要冷藏?。∫?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí)，其溶液的pH值會(huì)發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會(huì)受到影響對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月 ~ 一年。

2. 液體培養(yǎng)基中*的作用，及使用方法。
  幾乎所有的細(xì)胞對(duì)*有較高的要求，細(xì)胞需要*合成蛋白質(zhì)，在缺少*時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的*。*在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有*的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí)，應(yīng)重新加入原來(lái)量的*?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心在其服務(wù)項(xiàng)目中配制分裝了高濃度（100倍）的*溶液（1ml/支）。每支1ml的*加到99ml*培養(yǎng)基中，其終濃度為2mM/ml培養(yǎng)基。包裝為粉紅色，-24?C保存。

3.培養(yǎng)用液pH對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
   由于，大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差，無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。
但總體來(lái)說(shuō)，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些，偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長(zhǎng)。因此，我們?cè)谂渲婆囵B(yǎng)用液時(shí)，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過(guò)0.10um或0.22um濾膜過(guò)濾時(shí)，溶液的pH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。

4．原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的概念

從機(jī)體上獲取的組織，通過(guò)酶或機(jī)械方法分散成單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，在傳代前的培養(yǎng)一般稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的zui大優(yōu)點(diǎn)是：組織細(xì)胞剛脫離機(jī)體，生物性狀尚未發(fā)生較大變化，在一定程度上能夠反映體內(nèi)的狀態(tài)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞在生長(zhǎng)、繁殖一定時(shí)間后，由于空間不足或細(xì)胞密度過(guò)大導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)枯竭，會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)，因此需要進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，即傳代或稱為傳代培養(yǎng)，也就是將細(xì)胞按1：2~1：4的比例傳代。但嚴(yán)格說(shuō)來(lái)，不論在進(jìn)行傳代時(shí)稀釋與否，將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另一個(gè)培養(yǎng)瓶即稱為傳代培養(yǎng)。

傳代代數(shù)與細(xì)胞的世代（增殖代數(shù)）并不是同一個(gè)概念。在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，所說(shuō)的“第10代細(xì)胞”，僅指該細(xì)胞已經(jīng)傳代10次；細(xì)胞傳一代后，一般能倍增3~6次，經(jīng)過(guò)三個(gè)階段，即潛伏期、指數(shù)生長(zhǎng)期和平臺(tái)期。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到平臺(tái)期時(shí)，就需要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，否則細(xì)胞會(huì)中毒，發(fā)生形態(tài)改變，甚至死亡。

5．關(guān)于傳代培養(yǎng)

在進(jìn)行傳代時(shí)，如果是懸浮細(xì)胞，只需簡(jiǎn)單稀釋即可，若需*更換培養(yǎng)液只需低速離心沉淀，再懸浮于合適的培養(yǎng)液中即可。一般細(xì)胞每毫升接種數(shù)量為5´10⁴~8´10⁵個(gè)，傳代密度太低，細(xì)胞容易死亡，表現(xiàn)出細(xì)胞在達(dá)到增長(zhǎng)前有較長(zhǎng)的滯留期。在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)液會(huì)由于pH下降而呈現(xiàn)黃色，表明細(xì)胞已經(jīng)達(dá)到zui大密度需要換液或進(jìn)行傳代培養(yǎng)。如果是單層貼壁的細(xì)胞，等長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶表面，即可進(jìn)行傳代，多數(shù)細(xì)胞需用*處理將細(xì)胞從生長(zhǎng)物表面分離下來(lái)，以促進(jìn)傳代培養(yǎng)。

6．細(xì)胞系和細(xì)胞株

細(xì)胞系和細(xì)胞株，兩者曾一度混用，導(dǎo)致有些文獻(xiàn)中概念不清。下面所指的概念是現(xiàn)在國(guó)內(nèi)外比較通用的，也是絕大多數(shù)研究者接受的觀點(diǎn)。

原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功即稱為細(xì)胞系（Cell Line），因此細(xì)胞系可泛指一般可能傳代的細(xì)胞。其中能夠連續(xù)傳代的細(xì)胞叫做連續(xù)細(xì)胞系或無(wú)限細(xì)胞系，不能連續(xù)培養(yǎng)的稱為有限細(xì)胞系。大多數(shù)二倍體細(xì)胞為有限細(xì)胞系。通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細(xì)胞株（Cell Strain），也就是說(shuō)，細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。

7。細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境要求：

無(wú)污染環(huán)境：培養(yǎng)環(huán)境無(wú)毒和無(wú)菌是保證細(xì)胞生存的首要條件。當(dāng)細(xì)胞放置于體外培養(yǎng)時(shí)，與體內(nèi)相比細(xì)胞丟失了對(duì)微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身 代謝物質(zhì)積累等，可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中，保持細(xì)胞生存環(huán)境無(wú)污染、代謝物及時(shí)清除等，是維持細(xì)胞生存的基本條件。

恒定的溫度：維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長(zhǎng)，必須有恒定適宜的溫度。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為 36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng)，溫度上升不超過(guò)39℃時(shí)，細(xì)胞代謝與 溫度成正比；人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí)，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在40-41℃1小時(shí)，細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢 復(fù)；41-42℃1小時(shí)，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，大部分細(xì)胞死亡，個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí)，細(xì)胞全部死亡。

氣體環(huán)境：氣體是人體細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的能量和合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需用的 各種成分。 開(kāi)放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于 95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。