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氧化磷酸化系列/三磷酸腺苷測試盒/微量法

產(chǎn)品規(guī)格 :100管/48樣

測試方法：微量法

產(chǎn)品分類：氧化磷酸化系列

產(chǎn)品品牌：mlBio/酶聯(lián)生物

產(chǎn)品包裝：液體盒裝

運輸條件：快遞包郵

應(yīng)用范圍：僅供科研研究使用

保存條件：低溫避光保存

有效期：６個月

說明書 : 咨詢或電詢客服索取

供應(yīng)商：上海酶聯(lián)生物科技有限公司

注    意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

氧化磷酸化系列/三磷酸腺苷測試盒/微量法

測定意義：

線粒體復(fù)合體Ⅴ又稱F1F0-ATP合酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，由F1和F0兩個亞單位組成。該酶利用呼吸鏈產(chǎn)生的質(zhì)子電化學(xué)梯度催化ATP合成，也可逆過程水解ATP。此外，復(fù)合體Ⅴ還存在于葉綠體、異養(yǎng)菌和光合細(xì)菌中。復(fù)合體Ⅴ是線粒體氧化磷酸化和葉綠體光合磷酸化合成ATP的關(guān)鍵酶。

測定原理：

復(fù)合體Ⅴ水解ATP產(chǎn)生ADP和Pi，通過測定Pi增加速率來測定復(fù)合體Ⅴ活性。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣本的前處理：

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

①準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

②將勻漿600g，4℃離心5min。

③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。

④上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅴ（此步可選做）。

⑤步驟④中的沉淀即為線粒體，加入800uL試劑二和8uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復(fù)30次），用于復(fù)合體Ⅴ酶活性測定。